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        產品名稱: iElisa 喹乙醇檢測試劑盒
        產品時間: 2019-10-23
        產品型號: (C/N: CE145)
        產品特點: iElisa 喹乙醇檢測試劑盒

        iElisa 喹乙醇檢測試劑盒

        iElisa 喹乙醇檢測試劑盒

        iElisa 喹乙醇檢測試劑盒 的詳細介紹

        iElisa 喹乙醇檢測試劑盒

        iElisa 喹乙醇檢測試劑盒

        1. 概要 喹乙醇又稱喹酰胺醇,商品名為倍育諾、快育 靈,由于喹乙醇有中度至明顯的蓄積毒性,對大多 數動物有明顯致畸作用,對人也有潛在的三致性, 即致畸形,致突變,致癌。因此喹乙醇在美國和歐 盟都被禁止用作飼料添加劑?!吨袊F藥典》(2005 版)也有明確規定,喹乙醇被禁止用于家禽及水產養 殖。 2. 原理 本試劑盒采用間接競爭 ELISA 方法檢測等樣 本中的喹乙醇,在微孔條上預包被上偶聯抗原,利 用抗原與抗體的特異性免疫化學反應的原理來進 行的,樣本中的喹乙醇和微孔條上預包被偶聯抗原 競爭抗喹乙醇抗體,加入酶標記物后,用 TMB 底 物顯色,樣品中的喹乙醇含量與樣品的吸光度值呈 反比,與標準曲線比較即可得出喹乙醇含量。 3. 試劑盒的組成 1) 包被有抗抗體的96微孔板:1塊(96 孔,12條 ×8 孔) 2) 黃曲霉毒素B1標準品:0 ng/ml、0.5 ng/ml、 2.0ng/ml、5.0ng/ml、20ng/ml、50ng/ml 1 瓶 × 1.0ml 3) 喹乙醇抗體 1 瓶 ×10ml 4) 酶標二抗 1 瓶 ×10ml 5) 10× 濃縮洗滌液: 1 瓶 × 50ml 6) 稀釋緩沖液A: 1 瓶 ×50ml 7) 稀釋緩沖液B: 1 瓶 ×50ml 8) 顯色底物TMB: 1 瓶 ×17ml 9) 終止液: 1 瓶 × 7ml 10) 試劑盒說明書: 1 份 11) 質檢報告: 1 份 4. 需要的儀器、試劑 1)儀器 —酶標儀 450nm(iElisa 全自動酶標儀或相當者) —微量移液器:20μl-200μl 單道,100μl-1000μl 單道, 50μl-300μl 八道 —多功能旋轉混合器(或者搖床、高速均質器) —酶標板振蕩器 —渦旋混合器 —氮氣吹干儀 —50ml 離心管 —1.5ml 離心管 —離心機 —定性濾紙 —過濾漏斗 —天平:感量 0.01g 2) 試劑 —樣品提取液 70%甲醇:取 700ml 甲醇,加 300ml 純水,混勻。 —純水(蒸餾水、去離子水)、正己烷、三氯甲烷、 甲醇 5. 樣品處理 5.1 谷物類(玉米、小麥、大麥、大米、大豆): 1) 稱取 5.0g 粉碎(20 目過篩)的谷物類樣品于 50mL 離心管中,加入 25.0mL 純凈水提取液, 60℃水浴 10 分鐘,而后置于旋轉搖床上旋轉振 蕩提取 10 分鐘(或用高速均質器均質 1 分鐘, 或用手劇烈振蕩 5 分鐘),用定性濾紙過濾。 2) 將提取液用普通濾紙過濾,吸取 100μl 濾液置 于 1.5ml 離心管中,加入 400μl 稀釋緩沖液 A, 用渦旋混合器混勻。 稀釋倍數:25 5.2 飼料類: 1) 稱取 5.0g 粉碎(20 目過篩)的飼料樣品于 50mL 離心管中,加入 25.0mL 純凈水提取液,60℃ 水浴 10 分鐘,而后置于旋轉搖床上旋轉振蕩 提取 10 分鐘(或用高速均質器均質 1 分鐘,或 用手劇烈振蕩 5 分鐘),用定性濾紙過濾。 2) 將提取液用普通濾紙過濾,取 100μl 濾液置于 1.5ml 離心管中,加入 400μl 稀釋緩沖液 B,用 渦旋混合器混勻。 稀釋倍數:25 6. 酶聯免疫分析程序 6.1 測定之前注意事項1) 使用前將所有試劑平衡至室溫(20-25℃)。 2) 使用后迅速將試劑放入 2-8℃冷藏。 3) 在 ELISA 分析中的再現性,很大程度上取決于 洗板的*性,正確的洗板操作是 ELISA 測定 程序中的要點。 4) 所有溫育過程應避免陽光直射,并按要求用蓋 板覆蓋住酶標板。 6.2 溶液的配制 1) 提取液的配制:水要用純水、或蒸餾水、去離子 水 2) 洗滌液的配制:將濃縮洗滌液用純水稀釋 10 倍后使用。(例如:取 10 ml 濃縮液+90 ml 純 水, 可以用于 32 孔的檢測)。 6.3 測定程序 1) 將足夠標準品和樣品所用數量的孔條插入酶 標板架,標準品和樣品做兩個平行實驗,記錄 下標準和樣品的位置。未使用的酶標板用鋁箔 袋封好置 2-8℃冷藏保存。 2) 吸取 50μl 標準品或樣品分別加至相應的微孔 (雙孔)中,然后各加入 50μl 喹乙醇抗體,加 蓋,在 37℃溫育 30 分鐘(每個標準品和樣品 必須使用新的吸頭)。 3) 倒出孔中的液體,每孔加入 250μl 稀釋好的洗 滌液,置于酶標板振蕩器上振蕩 30 秒鐘(或 者手工振蕩),重復操作四次。洗完后用力在 吸水紙上拍干。 4) 再加入 100μl 酶標抗體,加蓋,37℃溫育 30 分鐘(每個標準品和樣品必須使用新的吸頭)。 5) 倒出孔中的液體,每孔加入 250μl 稀釋好的洗 滌液,置于酶標板振蕩器上振蕩 30 秒鐘(或 者手工振蕩),重復操作四次。洗完后用力在 吸水紙上拍干。 6) 每孔加入100μl顯色底物TMB,室溫避光溫育 10分鐘。 7) 每孔加入50μl 終止液。 8) 置于酶標儀中,振蕩混勻,在450nm處測定吸 光度值(OD值),參比波長630nm。(iElisa全 自動酶標儀可以直接讀出、打印濃度值)。 7. 結果判定 1)所獲得的每個濃度標準溶液和樣本吸光度值的 平均值(B)除以*個標準(0 標準)的吸光 度值(B0)再乘以 100%,即百分吸光度值。 百分吸光度值(%)= B ×100% B0 以喹乙醇標準品濃度值(ppb)為 X 軸,百分吸 光度值為 Y 軸,繪制標準曲線圖。相對應每一個樣 品的濃度可以從標準曲線上讀出。也可以用回歸方 程法,計算出樣本溶液濃度。利用計算機專業軟件, 更便于大量樣品的快速分析。 2) 樣品的實際濃度為讀數結果乘以相應稀釋倍 數。 3) 如果測定值超出檢測范圍,樣品提取溶液按一 定的比例用提取液進行稀釋。 8. 注意事項 1) 室溫低于20℃或試劑及樣品未回到室溫(20- 25℃)會導致數值偏低。 2) 在洗板過程中如果出現板孔干燥過久的情況, 則會出現標準曲線不成線性,重復性不好的現 象。所以洗板排干后應立即進行下一步操作。 3) 標準物質和顯色液對光敏感,避免直接暴露在 光線下。 4) 混合要均勻,洗板要*(包括加樣品和標準 液的時候都必需充分混合均勻)。 5) 終止液為強酸性物質,避免接觸皮膚。 6) 不要使用過了有效期的試劑盒,也不要混合使 用不同批次的試劑盒,這樣會引起測定結果不 準確。 7) 試劑盒的儲存條件是2-8℃,切勿冷凍。 9. 試劑盒的性能指標 1) 檢 測 限 LOD: 谷 物 10ppb(μg/kg) ,飼料 10ppb(μg/kg)。(LOD:空白樣品測定值+2 倍標 準偏差 SD) 2) 定量限 LOQ: 谷 物 12.5ppb(μg/kg) , 飼 料 12.5ppb(μg/kg)。 3) 定量檢測范圍:谷物 12.5-2500ppb,飼料 12.5-2500ppb。

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