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          首頁 >>> 產品展示 >>>  >>> clover試劑盒 >>> ((C/N: CE 118)iElisa 三聚氰胺檢測試劑盒
        產品名稱: iElisa 三聚氰胺檢測試劑盒
        產品時間: 2019-10-23
        產品型號: ((C/N: CE 118)
        產品特點: iElisa 三聚氰胺檢測試劑盒

        iElisa 三聚氰胺檢測試劑盒

        iElisa 三聚氰胺檢測試劑盒

        iElisa 三聚氰胺檢測試劑盒 的詳細介紹

        iElisa 三聚氰胺檢測試劑盒

        iElisa 三聚氰胺檢測試劑盒

        1. 概要 三聚氰胺是一種化工原料,在食品和飼料中不 得人為添加,長期攝入會造成生殖、泌尿系統的損 害,膀胱、腎部結石,并可進一步誘發膀胱癌。中 國衛生部等 5 部委 2011 年第 10 號公告中規定嬰兒 配方食品中三聚氰胺的*值為 1mg/kg,其他食品 中三聚氰胺的*值為 2.5mg/kg,高于上述*的 食品一律不得銷售。 2. 原理 測定的基礎是抗原-抗體反應。微孔板上包被有 三聚氰胺包被原。加入三聚氰胺(MEL)標準品或 樣品、和抗體后,游離的三聚氰胺與包被原競爭結 合抗體,沒有結合的抗體及抗原被洗去,再加入酶 標二抗,與抗體-包被原的結合物反應,再次洗板后, 將未結合的酶標二抗洗去。加入 TMB 底物顯藍色, 加入終止液后顏色由藍變黃,用酶標儀在 450nm 處 檢測,吸光值與樣品中三聚氰胺的含量成負相關, 與標準曲線比較即可得出三聚氰胺的含量。 3. 試劑盒的組成 1) 包被有包被原的96微孔板:1塊(96 孔,12 條 ×8 孔) 2) 三聚氰胺標準品:0 ng/ml、2.0ng/ml、 5.0ng/ml、15ng/ml、50ng/ml、150 ng/ml、 450ng/ml; 1 瓶 × 1.0ml 3) MEL抗體: 1 瓶 × 10ml 4) 酶標二抗: 1 瓶 × 10ml 5) 10× 濃縮洗滌液: 1 瓶 × 50ml 6) 復溶液 1 瓶 × 50ml 7) MEL稀釋緩沖液A: 1 瓶 ×50ml 8) MEL稀釋緩沖液B: 1 瓶 ×50ml 9) 顯色底物TMB: 1 瓶 ×17ml 10) 終止液: 1 瓶 × 7ml 11) 試劑盒說明書: 1 份 12) 質檢報告: 1 份 4. 需要的儀器、試劑 1)儀器 —酶標儀 450nm(iElisa 全自動酶標儀或相當者) —微量移液器:20μl-200μl 單道,100μl-1000μl 單道, 50μl-300μl 八道 —多功能旋轉混合器(或者搖床、高速均質器) —酶標板振蕩器 —渦旋混合器 —50ml 離心管 —1.5ml 離心管 —定性濾紙 —過濾漏斗 —天平:感量 0.01g 2) 試劑 —乙腈、正己烷、氫氧化鈉 —純水(蒸餾水、去離子水) 5. 樣品處理 樣品處理前的準備: (1)1mol/L NaOH 溶液的配制: 稱取 4.0g NaOH 加純水溶解并定容至 100ml。 (2)0.1 mol/L NaOH 溶液的配制: 稱取 0.4g NaOH 加去離子水定容 100ml。 (3)乙腈-0.1 mol/L NaOH 溶液的配制: 84ml 乙腈和 16ml 0.1M NaOH 混合均勻。 (4)1 mol/L HCl 溶液 取 8.6ml 濃 HCl 加純水定容至 100ml。 5.1 牛奶樣品 1) 取 2.0ml 樣品至 50nl 離心管中。 2) 加入 8.0ml 樣品提取液(乙腈-0.1MNaOH), 劇烈振蕩 15min,4000r/min 離心 10min。 3) 取 2.0ml 上清液在 50℃條件下氮氣或空氣流吹 至*干燥。 4) 用 1.0ml 正己烷溶解干燥的殘留物后,再加入 1.0ml 復溶液溶解混合 30s 5) 4000r/min 離心 10min,離心去除上層正己烷。 6) 取下層液 100μl,加 100μl MEL 稀釋緩沖液 A, 用渦旋混合器混勻。 7) 取 50μl 用于分析。 稀釋倍數:4 倍5.2 濃縮飼料 1) 將飼料樣品研碎,稱取 2.0g 粉碎的飼料樣品置 于 50ml 離心管中,加入 2.0ml 1mol/L HCl, 加入 16.0ml 純水,置于多功能旋轉混合器上振 蕩 10 分鐘(或使用高速均質器均質 3 分鐘,或 搖床上振蕩 40 分鐘)。 2) 4000r/min 離心 15min,取出 10.0ml 上清液并用 1mol/L NaOH 將 pH 值調至 6-8。(注:因飼料 樣品的不同,加入 1mol/L NaOH 的量有所差異, 根據情況調節,一般加入范圍是 0.5ml~1ml 之 間)。 3) 4000r/min 離心 15min。 4) 取上清液 100μl,加 400μl MEL 稀釋緩沖液 B, 用渦旋混合器混勻。 5) 取 50μl 進行分析 稀釋倍數:50 5.3 組織樣品 1) 取 2.0g 勻漿組織樣本于 50ml 離心管中。 2) 加入8.0ml乙腈-0.1mol/L NaOH充分振蕩5min, 4000r/min 離心 10min。 3) 取 2.0ml 上清液在 50℃條件下氮氣或空氣流吹 至*干燥。 4) 用 1.0ml 正己烷溶解干燥的殘留物后,再加入 1.0ml 復溶液混合 30s,4000r/min 離心 10min, 去除上層正己烷相 5) 取 50μl 下層液用于分析。 稀釋倍數:2 6. 酶聯免疫分析程序 6.1 測定之前注意事項 1) 使用前將所有試劑平衡至室溫(20-25℃)。 2) 使用后迅速將試劑放入 2-8℃冷藏。 3) 在 ELISA 分析中的再現性,很大程度上取決于 洗板的*性,正確的洗板操作是 ELISA 測定 程序中的要點。 4) 所有溫育過程應避免陽光直射,并按要求用蓋 板覆蓋住酶標板。 6.2 溶液的配制 洗滌液的配制:將濃縮洗滌液用純水稀釋 10 倍后 使用。(例如:取 10 ml 濃縮液+90 ml 純水, 可以用 于 32 孔的檢測)。 6.3 測定程序 1) 將足夠標準品和樣品所用數量的孔條插入酶 標板架,標準品和樣品做兩個平行實驗,記錄 下標準和樣品的位置。未使用的酶標板用鋁箔 袋封好置 2-8℃冷藏保存。 2) 吸取 50μl 標準品或樣品分別加至相應的微孔 (雙孔)中,然后各加入 50μl 的 MEL 抗體, 加蓋,在室溫溫育 30 分鐘(每個標準品和樣 品必須使用新的吸頭)。 3) 倒出孔中的液體,每孔加入 250μl 稀釋好的洗 滌液,置于酶標板振蕩器上振蕩 30 秒鐘(或 者手工振蕩),重復操作四次。洗完后用力在 吸水紙上拍干。 4) 然后各加入 100μl 酶標二抗,加蓋,在室溫溫 育 30 分鐘(每個標準品和樣品必須使用新的 吸頭)。 5) 重復洗板步驟 3) 6) 每孔加入100μl顯色底物,室溫避光溫育10分 鐘。 7) 每孔加入50μl 終止液。 8) 置于酶標儀中,振蕩混勻,在450nm處測定吸 光度值(OD值),參比波長630nm。(iElisa全 自動酶標儀可以直接讀出、打印濃度值)。 7. 結果判定 1) 所獲得的每個濃度標準溶液和樣本吸光度值的 平均值(B)除以*個標準(0 標準)的吸光 度值(B0)再乘以 100%,即百分吸光度值。 百分吸光度值(%)= B ×100% B0 以三聚氰胺標準品濃度值(ppb)為 X 軸,百 分吸光度值為 Y 軸,繪制標準曲線圖。相對應每一 個樣品的濃度可以從標準曲線上讀出。也可以用回 歸方程法,計算出樣本溶液濃度。利用計算機專業 軟件,更便于大量樣品的快速分析。 2) 樣品的實際濃度為讀數結果乘以相應稀釋倍 數。 3) 如果測定值超出檢測范圍,樣品提取溶液按一 定的比例用相應的稀釋緩沖液進行稀釋。 8. 注意事項 1) 室溫低于20℃或試劑及樣品未回到室溫(20- 25℃)會導致數值偏低。 2) 在洗板過程中如果出現板孔干燥過久的情況, 則會出現標準曲線不成線性,重復性不好的現象。所以洗板排干后應立即進行下一步操作。 3) 標準物質和顯色液對光敏感,避免直接暴露在 光線下。 4) 混合要均勻,洗板要*(包括加樣品和標準 液的時候都必需充分混合均勻)。 5) 終止液為強酸性物質,避免接觸皮膚。 6) 不要使用過了有效期的試劑盒,也不要混合使 用不同批次的試劑盒,這樣會引起測定結果不 準確。 7) 試劑盒的儲存條件是2-8℃,切勿冷凍。 9. 試劑盒的性能指標 1)檢測限 LOD: 牛奶 5ppb(μg /kg),飼料 50ppb, 組織 2.0ppb。(LOD:空白樣品測定值+2 倍標準 偏差 SD) 2)定量限 LOQ: 牛奶 10ppb,飼料 100ppb,組織 4.0ppb。 3 ) 定 量 檢 測 范 圍 : 牛 奶 10-1800ppb ,飼料 100-22500ppb,組織 4.0-900ppb 。

         

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