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          首頁 >>> 產品展示 >>>  >>> clover試劑盒 >>> (C/N: CE 205)iElisa 玉米赤霉烯酮檢測試劑盒
        產品名稱: iElisa 玉米赤霉烯酮檢測試劑盒
        產品時間: 2019-10-23
        產品型號: (C/N: CE 205)
        產品特點: iElisa 玉米赤霉烯酮檢測試劑盒

        iElisa 玉米赤霉烯酮檢測試劑盒

        iElisa 玉米赤霉烯酮檢測試劑盒

        iElisa 玉米赤霉烯酮檢測試劑盒 的詳細介紹

        iElisa 玉米赤霉烯酮檢測試劑盒

        iElisa 玉米赤霉烯酮檢測試劑盒

        1. 概要 iElisa 玉米赤霉烯酮檢測試劑盒利用競爭性酶 聯免疫反應原理,對玉米、麥類、豆類、大米等谷 物和飼料中玉米赤霉烯酮的含量進行定量檢測。玉 米赤霉烯酮是由鐮刀菌類的真菌形成,它是一種植 物性激素,并具雌激素性特征。玉米赤霉烯酮具有 較強的生殖毒性和致畸作用,可引發動物發生雌性 激素亢進癥,導致動物不孕或流產,對家畜特別是 豬、牛和羊的影響較大。中國標準規定:玉米、小 麥中玉米赤霉烯酮不得超過 60μg /kg,配合飼料、 飼料原料玉米中玉米赤霉烯酮不得超過 500μg /kg。 2. 原理 測定的基礎是抗原-抗體反應。微孔板上包被有 抗抗體。加入玉米赤霉烯酮(ZEN)標準品或樣品、 酶標抗原和抗體后,游離的玉米赤霉烯酮與酶標抗 原競爭結合抗體,抗體或抗體結合物與固定在微孔 板上的抗抗體再結合,沒有結合的標準品、酶標抗 原及抗體被洗去,加入 TMB 底物顯藍色,加入終 止液后顏色由藍變黃,用酶標儀在 450nm 處檢測, 吸光值與樣品中玉米赤霉烯酮含量成負相關,與標 準曲線比較即可得出玉米赤霉烯酮的含量。 3. 試劑盒的組成 1) 包被有抗抗體的96微孔板:1塊(96 孔,12 條 ×8 孔) 2) 玉米赤酶烯酮標準品:0 ng/ml 、0.5ng/ml、 2.0ng/ml、5.0ng/ml、15.0ng/ml、50.0ng/ml; 1 瓶 × 1.0ml 3) ZEN酶標抗原: 1 瓶 ×10ml 4) ZEN抗體: 1 瓶 × 10ml 5) 10× 濃縮洗滌液: 1 瓶 × 50ml 6) ZEN稀釋緩沖液A: 1 瓶 ×50ml 7) ZEN稀釋緩沖液B: 1 瓶 ×50ml 8) 顯色底物TMB: 1 瓶 ×17ml 9) 終止液: 1 瓶 × 7ml 10) 試劑盒說明書: 1 份 11) 質檢報告: 1 份 4. 需要的儀器、試劑 1)儀器 —酶標儀 450nm(iElisa 全自動酶標儀或相當者) —微量移液器:20μl-200μl 單道,100μl-1000μl 單道, 50μl-300μl 八道 —多功能旋轉混合器(或者搖床、高速均質器) —酶標板振蕩器 —渦旋混合器 —50ml 離心管 —1.5ml 離心管 —定性濾紙 —過濾漏斗 —天平:感量 0.01g 2) 試劑 —樣品提取液 70%甲醇:取 700ml 甲醇,加 300ml 純水,混勻。 —純水(蒸餾水、去離子水) 5. 樣品處理 5.1 谷物(玉米、小麥、大麥、大米、大豆): 1) 稱取 5.0g 粉碎樣品于 50ml 離心管中,加入 25.0ml 樣品提取液 70%甲醇,置于多功能旋轉 混合器上振蕩 15 分鐘(或使用高速均質器均質 3 分鐘,或搖床上振蕩 40 分鐘),靜置 5 分鐘。 2) 將提取液用普通濾紙過濾,吸取 100μl 濾液置 于 1.5ml 離心管中,加入 300μl ZEN 稀釋緩沖 液 A,用渦旋混合器混勻。 稀釋倍數:20 5.2 飼料: 1) 稱取 5.0g 粉碎樣品于 50ml 離心管中,加入 25.0ml 樣品提取液 70%甲醇,置于多功能旋轉 混合器上振蕩 15 分鐘(或使用高速均質器均 質 3 分鐘,或搖床上振蕩 40 分鐘),靜置 5 分 鐘。 2) 將提取液用普通濾紙過濾,測 pH 值,如果不 在 pH6-8 范圍內,請用酸或堿進行調整。 3) 吸取 20μl 濾液置于 1.5ml 離心管中,加入 380ul ZEN 稀釋緩沖液 B,用渦旋混合器混勻。 稀釋倍數:1005.3 尿液樣品: 1) 取 5ml 待檢樣品于 15ml 離心管中,3000r/min, 離心 10 分鐘 2) 吸取 100μl 離心后澄清樣品置于 1.5ml 離心管 中 3) 加入 400μl ZEN 稀釋緩沖液 A,用渦旋混合器 混勻。 稀釋倍數:5 5.4 飼料(高靈敏度): 4) 稱取 5.0g 粉碎樣品于 50ml 離心管中,加入 25.0ml 樣品提取液 70%甲醇,置于多功能旋轉 混合器上振蕩 15 分鐘(或使用高速均質器均 質 3 分鐘,或搖床上振蕩 40 分鐘),靜置 5 分 鐘。 5) 將提取液用普通濾紙過濾,測 pH 值,如果不 在 pH6-8 范圍內,請用酸或堿進行調整。 6) 吸取 50μl 濾液置于 1.5ml 離心管中,加入 200ul ZEN 稀釋緩沖液 B,用渦旋混合器混勻。 稀釋倍數:25 5.5 植物油(花生油、玉米油、大豆油、芝麻油、 橄欖油等): 1) 稱取 5.0g 樣品于 50ml 離心管中,加入 25.0ml 樣品提取液 70%甲醇,置于多功能旋轉混合器 上振蕩 15 分鐘(或使用高速均質器均質 3 分 鐘,或搖床上振蕩 40 分鐘),靜置 5 分鐘。 2) 將提取液用普通濾紙過濾,吸取 100μl 濾液置 于 1.5ml 離心管中,加入 300μl ZEN 稀釋緩沖 液 C,用渦旋混合器混勻。 稀釋倍數:20 5.6 塘渣樣品: 1) 稱取 5.0g 粉碎樣品于 50ml 離心管中,加入 25.0ml 樣品提取液 70%甲醇,置于多功能旋轉 混合器上振蕩 15 分鐘(或使用高速均質器均 質 3 分鐘,或搖床上振蕩 40 分鐘),靜置 5 分 鐘。 2) 將提取液用普通濾紙過濾,吸取 100μl 濾液置 于 1.5ml 離心管中,加入 300μl ZEN 稀釋緩沖 液 C,用渦旋混合器混勻。 稀釋倍數:20 6. 酶聯免疫分析程序 6.1 測定之前注意事項 1) 使用前將所有試劑平衡至室溫(20-25℃)。 2) 使用后迅速將試劑放入 2-8℃冷藏。 3) 在 ELISA 分析中的再現性,很大程度上取決于 洗板的*性,正確的洗板操作是 ELISA 測定 程序中的要點。 4) 所有溫育過程應避免陽光直射,并按要求用蓋 板覆蓋住酶標板。 6.2 溶液的配制 1) 提取液的配制: 根據實驗所需的量配制 70%的 甲醇水溶液(水要用純水、或蒸餾水、去離子 水) 2) 洗滌液的配制:將濃縮洗滌液用純水稀釋 10 倍后使用。(例如:取 10 ml 濃縮液+90 ml 純 水, 可以用于 32 孔的檢測)。 6.3 測定程序 1) 將足夠標準品和樣品所用數量的孔條插入酶 標板架,標準品和樣品做兩個平行實驗,記錄 下標準和樣品的位置。未使用的酶標板用鋁箔 袋封好置 2-8℃冷藏保存。 2) 吸取 50μl 標準品或樣品分別加至相應的微孔 (雙孔)中,然后各加入 50μl 的 ZEN 酶標抗 原,再加入 50μl 的 ZEN 抗體,加蓋,在室溫 溫育 30 分鐘(每個標準品和樣品必須使用新 的吸頭)。 3) 倒出孔中的液體,每孔加入 250μl 稀釋好的洗 滌液,置于酶標板振蕩器上振蕩 30 秒鐘(或 者手工振蕩),重復操作四次。洗完后用力在 吸水紙上拍干。 4) 每孔加入150μl底物,室溫避光溫育10分鐘。 5) 每孔加入50μl 終止液。 6) 置于酶標儀中,振蕩混勻,在450nm處測定吸 光度值(OD值),參比波長630nm。(iElisa全 自動酶標儀可以直接讀出、打印濃度值)。 7. 結果判定 1) 所獲得的每個濃度標準溶液和樣本吸光度值 的平均值(B)除以*個標準(0 標準)的吸 光度值(B0)再乘以 100%,即百分吸光度值。 百分吸光度值(%)= B ×100% B0 以玉米赤霉烯酮標準品濃度值(ppb)為 X 軸, 百分吸光度值為 Y 軸,繪制標準曲線圖。相對應每 一個樣品的濃度可以從標準曲線上讀出。也可以用回歸方程法,計算出樣本溶液濃度。利用計算機專 業軟件,更便于大量樣品的快速分析。 2) 樣品的實際濃度為讀數結果乘以相應的稀釋倍 數。 3) 如果測定值超出檢測范圍,樣品提取溶液按一 定的比例用 70%甲醇進行稀釋。 8. 注意事項 1) 室溫低于20℃或試劑及樣品未回到室溫(20- 25℃)會導致數值偏低。 2) 在洗板過程中如果出現板孔干燥過久的情況, 則會出現標準曲線不成線性,重復性不好的現 象。所以洗板排干后應立即進行下一步操作。 3) 標準物質和顯色液對光敏感,避免直接暴露在 光線下。 4) 混合要均勻,洗板要*(包括加樣品和標準 液的時候都必需充分混合均勻)。 5) 終止液為強酸性物質,避免接觸皮膚。 6) 不要使用過了有效期的試劑盒,也不要混合使 用不同批次的試劑盒,這樣會引起測定結果不 準確。 7) 試劑盒的儲存條件是2-8℃,切勿冷凍。 9. 試劑盒的性能指標 1) 檢測限 LOD: 谷物 5ppb(μg /kg),飼料 50ppb(15ppb),尿液 3.0ppb,植物油 5ppb(μg /kg)。(LOD:空白樣品測定值+2 倍標準偏差 SD) 2) 定量限 LOQ: 谷物 10ppb,飼料 100ppb(20ppb), 尿液 5.0ppb,植物油 20ppb。 3) 定 量 檢 測 范 圍 : 谷 物 10-1000ppb , 飼 料 100-5000ppb(20-1200ppb), 尿液 5-250ppb, 植物油 20-1000ppb。

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