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          首頁 >>> 產品展示 >>>  >>> clover試劑盒 >>> (C/N: CE204)iElisa 赭曲霉毒素 A 檢測試劑盒
        產品名稱: iElisa 赭曲霉毒素 A 檢測試劑盒
        產品時間: 2019-10-23
        產品型號: (C/N: CE204)
        產品特點: iElisa 赭曲霉毒素 A 檢測試劑盒
        iElisa 赭曲霉毒素 A 檢測試劑盒
        iElisa 赭曲霉毒素 A 檢測試劑盒

        iElisa 赭曲霉毒素 A 檢測試劑盒 的詳細介紹

        iElisa 赭曲霉毒素 A 檢測試劑盒 

        iElisa 赭曲霉毒素 A 檢測試劑盒 

        1. 概要 赭曲霉毒素A由 Aspergillus 和 Penicillium 兩類霉菌產生,除明顯的腎毒性外,赭曲霉毒素 A 還表現出肝毒性、致畸性、致癌性和免疫抑制性等 特性。對人體健康而言,危害不僅來源于污染的植 物性食品,也通過動物性食品的攝入。我國規定谷 物、豆類及其制品中赭曲霉毒素A不得超過5μg/kg, 歐盟規定谷物、豆類及其制品中赭曲霉毒素 A 不得 超過 3μg/kg。 2. 原理 測定的基礎是抗原-抗體反應。微孔板上包被有 抗抗體。加入赭曲霉毒素 A(OTA)標準品或樣品、 酶標抗原和抗體后,游離的赭曲霉毒素 A 與酶標抗 原競爭結合抗體,抗體或抗體結合物與固定在微孔 板上的抗抗體再結合,沒有結合的標準品、酶標抗 原及抗體被洗去,加入 TMB 底物顯藍色,加入終 止液后顏色由藍變黃,用酶標儀在 450nm 處檢測, 吸光值與樣品中赭曲霉毒素 A 含量成負相關,與標 準曲線比較即可得出赭曲霉毒素 A 的含量。 3. 試劑盒組成 1) 包被有抗抗體的96微孔板:1塊(96孔,12條×8 孔) 2) 赭曲霉標準品:0 ppb、0.2 ppb、0.5 ppb、 1.0 ppb、 2.0 ppb、5.0 ppb 1 瓶 × 1.0ml 3) OTA抗體: 1 瓶 × 10ml 4) OTA酶標抗原: 1 瓶 × 10ml 5) 10× 濃縮洗滌液: 1 瓶 × 50ml 6) OTA稀釋緩沖液: 1 瓶 ×50ml 7) 顯色底物液: 1 瓶 ×17ml 8) 反應終止液: 1 瓶 × 7ml 9) 試劑盒說明書 10) 質檢報告 4. 需要的儀器、試劑 1)儀器 —酶標儀 450nm(iElisa 全自動酶標儀或相當者) —微量移液器:20μl-200μl 單道,100μl-1000μl 單道, 50μl-300μl 八道 —多功能旋轉混合器(或者搖床、高速均質器) —酶標板振蕩器 —渦旋混合器 —50ml 離心管 —1.5ml 離心管 —定性濾紙 —過濾漏斗 —天平:感量 0.01g 2)試劑 —樣品提取液 70%甲醇:取 700ml 甲醇,加 300ml 純水,混勻。 —純水(蒸餾水、去離子水) 5. 樣品處理 5.1 谷物(玉米、小麥、大麥、大米、大豆): 1) 稱取 5.0g 粉碎樣品于 50ml 離心管中,加入 25.0ml 樣品提取液 70%甲醇,置于多功能旋轉 混合器上振蕩 10 分鐘(或使用高速均質器均質 3 分鐘,或搖床上振蕩 40 分鐘)。 2) 將提取液用普通濾紙過濾,吸取 200μl 濾液置 于 1.5ml 離心管中,加入 200μl OTA 稀釋緩沖 液,用渦旋混合器混勻。 稀釋倍數:10 5.2 飼料: 1) 稱取 5.0g 粉碎樣品于 50ml 離心管中,加入 25.0ml 樣品提取液 70%甲醇,置于多功能旋轉 混合器上振蕩 10 分鐘(或使用高速均質器均 質 3 分鐘,或搖床上振蕩 40 分鐘)。 2) 將提取液用普通濾紙過濾,吸取 100μl 濾液置 于 1.5ml 離心管中,加入 400μl OTA 稀釋緩沖 液,用渦旋混合器混勻。 稀釋倍數:25 5.3 尿液樣品: 1) 取 5ml 待檢樣品于 15ml 離心管中,3000r/min, 離心 10 分鐘2) 吸取 100μl 離心后澄清樣品置于 1.5ml 離心管 中 3) 加入 400μl OTA 稀釋緩沖液,用渦旋混合器混 勻。 稀釋倍數:5 6.酶聯免疫分析程序 6.1 測定之前注意事項 1) 使用前將所有試劑平衡至室溫(20-25℃)。 2) 使用后迅速將試劑放入 2-8℃冷藏。 3) 在 ELISA 分析中的再現性,很大程度上取決于 洗板的*性,正確的洗板操作是 ELISA 測定 程序中的要點。 4) 所有孵育過程應避免陽光直射,并按要求用蓋 板覆蓋住酶標板。 6.2 溶液的配制 1) 提取液的配制: 根據實驗所需的量配制 70%的 甲醇水溶液(水要用純水、或蒸餾水、去離子 水) 2) 洗滌液的配制:將濃縮洗滌液用去離子水稀釋 10 倍后使用(1 份濃縮洗滌液加 9 份蒸餾水)。 6.3 測定程序 1) 將足夠標準品和樣品所用數量的孔條插入酶 標板架,標準品和樣品做兩個平行實驗,記錄 下標準和樣品的位置。未使用的酶標板用鋁箔 袋封好置 2-8℃冷藏保存。 2) 分別吸取 50μl 標準品和樣品加至相應的微孔 (雙孔)中,然后各加入 50μl 酶標抗原,再 加入 50μl 抗體,加蓋,在室溫反應 40min(每 個標準和樣品必須使用新的吸頭)。 3) 倒出孔中的液體,將微孔架倒置在吸水紙上拍 打以保證*除去孔中的液體,然后每孔加入 250μl 稀釋好的洗滌液洗滌,振蕩后倒出孔中 的液體,拍干;重復操作四次,洗板時每次間 隔20s,洗完后用力在吸水紙上排干。 4) 每孔加入150μl底物, 室溫避光溫育15min。 5) 每孔加入50μl 反應終止液,混勻。 6) 置于酶標儀中,振蕩混勻,在450nm處測定吸 光度值(OD值),參比波長630nm。(iElisa全 自動酶標儀可以直接讀出、打印濃度值)。 7. 結果判定 1) 所獲得的每個濃度標準溶液和樣本吸光度值 的平均值(B)除以*個標準(0 標準)的吸 光度值(B0)再乘以 100%,即百分吸光度值。 百分吸光度值(%)= B ×100% B0 以赭曲霉毒素 A 標準品濃度值(ppb)為 X 軸, 百分吸光度值為 Y 軸,繪制標準曲線圖。相對應每 一個樣品的濃度可以從標準曲線上讀出。也可以用 回歸方程法,計算出樣本溶液濃度。利用計算機專 業軟件,更便于大量樣品的快速分析。 2) 樣品的實際濃度為讀數結果乘以相應的稀釋倍 數。 3) 如果測定值超出檢測范圍,樣品提取溶液按一 定的比例用 70%甲醇進行稀釋。 8. 注意事項 1) 室溫低于20℃或試劑及標本未回到室溫(20- 25℃)會導致數值偏低。 2) 在洗板過程中如果出現板孔干燥過久的情況, 則會出現標準曲線不成線性,重復性不好的現 象。所以洗板排干后應立即進行下一步操作。 3) 標準物質和顯色液對光敏感,避免直接暴露在 光線下。 4) 混合要均勻,洗板要*(包括加樣品和標準 液的時候都必需充分混合均勻)。 5) 反應停止液為強酸性物質,避免接觸皮膚。 6) 不要使用過了有效期的試劑盒,也不要稀釋或 攙雜使用不同生產廠家的試劑盒這樣會引起 靈敏度降低。 7) 試劑盒的儲存條件是2-8℃,切勿冷凍。 9. 檢測方法靈敏度、準確度、精密度 1) 檢測限 LOD: 谷物 1ppb(μg /kg),飼料 2.5ppb 尿液 1.0。(LOD:空白樣品測定值+2 倍標準偏 差 SD) 2) 定量限 LOQ: 谷物 2ppb,飼料 5ppb,尿液 1.5ppb。 3) 定量檢測范圍:谷物 2-50ppb,飼料 5-125ppb, 飼料 1.5-25ppb。

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